<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ep-patent-document SYSTEM "OpenDataPatent_cz.dtd">
<ep-patent-document lang="en" file="OpendataIPOCZ_PT_DIFF_PUV2025-42578.xml" country="CZ" doc-number="38529" kind="U1">
  <bibliographic-data country="CZ">
    <publication-reference>
      <document-id>
        <country>CZ</country>
        <doc-number>38529</doc-number>
        <kind>U1</kind>
        <date>2025-04-15</date>
      </document-id>
    </publication-reference>
    <classifications-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="1">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>70</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>F</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="2">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>31</main-group>
        <subgroup>663</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="3">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>47</main-group>
        <subgroup>34</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20170101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="4">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>P</subclass>
        <main-group>17</main-group>
        <subgroup>02</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="5">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>P</subclass>
        <main-group>41</main-group>
        <subgroup>00</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="6">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>44</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="7">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>26</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="8">
        <section>C</section>
        <class>07</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>40</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
    </classifications-ipcr>
    <classifications-cpc>
      <classification-cpc sequence="1">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>0014</subgroup>
        <symbol-position>F</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="10">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2300</main-group>
        <subgroup>404</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="11">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>C</section>
        <class>07</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>4009</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="2">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20210501</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>70</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="3">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>31</main-group>
        <subgroup>663</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="4">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20170801</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>47</main-group>
        <subgroup>34</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="5">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20180101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>P</subclass>
        <main-group>17</main-group>
        <subgroup>02</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="6">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20180101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>P</subclass>
        <main-group>41</main-group>
        <subgroup>00</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="7">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>26</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="8">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>44</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="9">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2300</main-group>
        <subgroup>216</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20250318</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
    </classifications-cpc>
    <application-reference>
      <document-id>
        <country>CZ</country>
        <doc-number>2025-42578</doc-number>
        <date>2024-07-01</date>
      </document-id>
    </application-reference>
    <language-of-filing>cs</language-of-filing>
    <language-of-publication>cs</language-of-publication>
    <priority-claims>
      <priority-claim sequence="1" kind="national">
        <country>CZ</country>
        <date>2024-07-01</date>
      </priority-claim>
    </priority-claims>
    <invention-title lang="CS">Nanovlákenný materiál</invention-title>
    <invention-title lang="EN">A nanofibrous material</invention-title>
  </bibliographic-data>
  <description id="desc" lang="cs">
    <p num="1">
      <b>Nanovlákenný</b>
      <b> materiál</b>
    </p>
    <p num="2"> </p>
    <p num="3"> </p>
    <p num="4">Oblast techniky </p>
    <p num="5"> </p>
    <p num="6">Technické řešení spadá do oblasti nanovlákenných vlákenných materiálů (obecně spadajících do kategorie netkaných textilií), vyrobených metodou elektrického zvlákňování z makromolekulárních materiálů, jako nosičů farmaceutických přípravků pro topické použití při terapiích. </p>
    <p num="7"> </p>
    <p num="8"> </p>
    <p num="9">Dosavadní stav techniky </p>
    <p num="10"> </p>
    <p num="11">Netkané textilie na bázi nanovlákenných polymerních materiálů mají ve zdravotnictví široké využití. Jelikož jsou tvořeny sítí vláken o průměru řádově desítek až stovek nanometrů s mezivlákennými prostory o charakteristickém průměru stovek nanometrů až jednotek mikrometrů, jsou schopné mechanicky zpomalovat a omezovat průniku mikroorganismů jako jsou bakterie a viry. Z toho důvodu se užívají příkladně jako ochranné membrány při ošetřování a hojení ran, obvazy, filtry a substráty pro tkáňové inženýrství (viz databáze EUDAMED, Hodnocení zdravotnického prostředku NANOTARDIS k léčbě čistých akutních a chronických kožních defektů, Ref. CZ-CA-001/CIV-CZ-16-06-016164). Důležité je, aby materiál použitý pro tvorbu nanovlákenné vrstvy splňoval podmínku biokompatibility. Nejčastěji se proto používají polymery a kopolymery na bázi kyseliny mléčné (PLA, PLLA, PDLLA). Popsáno bylo však i použití polyethylenglykolu (PEG), polyuretanu (PU), polyvinylacetátu (PVAc), polyvinylalkoholu (PVA), polyvinylpyrrolidonu (PVP), polykaprolaktonu (PCL), acetátových vláken (CA), hypromelózy (HPMC), PLG (kys. polyglykolová) a želatiny. </p>
    <p num="12"> </p>
    <p num="13">Nejčastěji používanou metodou přípravy polymerních nanovláken je elektrické zvlákňování (tzv. elektrospinning). Základem stejnosměrné varianty této metody (tzv. DC elektrospinning) je zvlákňovací elektroda nejrůznější geometrie (válec, drát/struna, tyč, disk, kapilára) a kovový elektricky aktivní kolektor, mezi které je vytvořeno elektrické pole v důsledku potenciálového rozdílu mezi zvlákňovací elektrodou a kolektorem. Roztok polymeru je nanášen na pracovní plochu zvlákňovací elektrody a působením elektrického pole je formován do tenkého proudu kapaliny. Následně dojde k odpaření rozpouštědla a vznikají tenká vlákna polymeru, která se zachycují na kolektoru. Krom DC varianty elektrospinningu existuje i jeho varianta využívající střídavé elektrické pole (tzv. AC elektrospinning), viz evropský patent EP 2931951 o názvu „Způsob pro výrobu polymemích nanovláken zvlákňováním roztoku nebo taveniny polymeru v elektrickém poli a lineární útvar z polymemích nanovláken vytvořený tímto způsobem“, který je validován v ČR. </p>
    <p num="14"> </p>
    <p num="15">V současné době je studováno další možné použití polymerních nanovláken, zejména jako nosičů farmaceutických přípravků. Výhodou je snadná manipulace s léčivem v takové formě, topická aplikace léčiva a u složitějších systémů i řízené uvolňování. Jsou známa řešení nesoucí například hepariny, analgetika, nesteroidní antirevmatika a kancerostatika. Dále i antibiotika, v jejichž případě byla studována nanovlákna nesoucí příkladně β-laktamová antibiotika, tetracyklinová antibiotika a rifamyciny. </p>
    <p num="16"> </p>
    <p num="17">Mezi nejjednodušší postupy pro přípravu nanovláken nesoucích farmaceuticky aktivní látky patří imobilizace léčiva na předem připravené nanovlákenné vrstvy, případně přimíchání léčiva do roztoku polymeru použitého pro elektrostatické zvlákňování (tzv. elektrospinning ze směsi neboli blend elektrospinning). Výhodou těchto postupů je možnost použití standardního laboratorního nebo průmyslového přístrojového vybavení. Nevýhodou je, že se léčiva ze vzniklého materiálu uvolňují prostou difúzí. Časový vývoj neboli profil uvolňování, které v tomto případě není externě řízené, je charakterizován velmi rychlým nárůstem koncentrace léčiva difundujícího do okolního roztoku, kdy se takto může během první hodiny uvolnit až 70 % inkorporovaného léčiva, jak je popsáno například v dokumentu J. Zeng eí al., (doi: I0.1016/j.jconrel.2005.02.024). Následuje rychlý pokles rychlosti uvolňování, která se následně ustálí na výrazně nižší hodnotě. Toto může být problémem u léčiv s malou terapeutickou šíří, kdy počáteční rychlé zvýšení koncentrace může dosáhnout až toxických hodnot a následně může klesnout až pod terapeutickou hodnotu. Zmíněný problém lze vyřešit použitím materiálů s řízeným uvolňováním, které ovšem vyžaduje přípravu vláken pokrytých vrstvou zabraňující difúzi léčiva, a jeho dávkování řízeným rozpadem polymerních vláken. Příprava takovýchto materiálů ovšem vyžaduje speciální postupy a složitější, a tedy i dražší, přístrojové vybavení. </p>
    <p num="18"> </p>
    <p num="19">Nanovlákna nesoucí antibiotika mohou být využita jako krycí membrány při ošetřování a hojení ran, jelikož zabraňují množení mikroorganismů v ráně a vzniku infekce. Použití materiálů, které antibiotika neřízené uvolňují difúzí, ovšem přináší riziko vzniku bakteriální rezistence, jelikož koncentrace léčiva vzhledem k profilu uvolňování rychle klesne pod účinnou úroveň. Je tedy nutné nosič často měnit. Stejně tak velké množství látky uvolněné z čerstvého nosiče může způsobovat komplikace. V neposlední řadě je použití těchto materiálů při terapiích problematické kvůli nízké tepelné a UV stabilitě některých aktivních látek, což zabraňuje možnosti jejich sterilizace před samotným terapeutickým použitím. </p>
    <p num="20"> </p>
    <p num="21">Lipofosfonoxiny třetí generace (LEGO-LPPO), popsané v patentové přihlášce PV 2019-769 a v publikaci D.D. Do Pham, V. Mojr, a spol., J. Med. Chem. 65(14) (2022) 10045-10078., jsou novou skupinou látek, patřících mezi antibakteriální peptidomimetika. Tyto látky vykazují silné antibakteriální účinky proti gram-pozitivním i gram-negativním bateriím, nejsou genotoxické a jejich použití je spojeno s velmi nízkou pravděpodobností vzniku bakteriální rezistence. Dále jsou tyto látky stabilní vůči působení vysokých teplot i UV záření. Syntetická příprava je nenáročná a jejich modularita umožňuje cíleně ladit jejich biologické vlastnosti. Významnou výhodou oproti předchozím generaci lipofosfonoxinů spočívá v tom, že přítomnost sérových albuminů nesnižuje antibakteriální aktivitu. </p>
    <p num="22"> </p>
    <p num="23">Předmětem technického řešení je vytvoření materiálu pro topickou terapii infekčních onemocnění a ošetření popálenin, který odstraňuje výše zmíněné nedostatky dosavadního stavu techniky. </p>
    <p num="24"> </p>
    <p num="25"> </p>
    <p num="26">Podstata technického řešení </p>
    <p num="27"> </p>
    <p num="28">Předkládané technické řešení odstraňuje nedostatky identifikované u dosavadního stavu techniky, a to kombinací nanovlákenného materiálu na bázi polyesteru nebo polyvinylalkoholu nebo kombinace polyesteru a polyvinylalkoholu s léčivy, patřícími do skupiny lipofosfonoxinů třetí generace (LEGO- LPPO) obecného vzorce I, kde koncentrace léčivé látky (LEGO-LPPO) v použitém polymeruje 2 až 20 %. Spojením těchto dvou složek vzniká materiál s nezřejmými vlastnostmi, který se zásadním způsobem liší od dosavadních léčiv inkorporovaných do polymerních nanovlákenných materiálů. </p>
    <p num="29"> </p>
    <p num="30">Technické řešení tedy předkládá nanovlákenný materiál, který je tvořen látkou ze skupiny lipofosfonoxinů obecného vzorce I </p>
    <p num="31"> </p>
    <p num="32">
      <img id="i0001" he="106" wi="101" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0001"/>
      <br/>
      <br/>(I), </p>
    <p num="33"> </p>
    <p num="34">kde substituent X je zvolen z těchto struktur: </p>
    <p num="35"> </p>
    <p num="36">
      <img id="i0002" he="275" wi="327" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0002"/>
      <br/>
    </p>
    <p num="37">kde m = 1 až 3; </p>
    <p num="38"> </p>
    <p num="39">substituent Y1 a Y2 je nezávisle zvolen z: vybrán z nezávislých struktur </p>
    <p num="40"> </p>
    <p num="41">
      <img id="i0003" he="127" wi="363" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0003"/>
      <br/>
    </p>
    <p num="42"> </p>
    <p num="43">kde n = 0 až 12 a o = 0 až 12 a kde R1, R2, R3, R4 a R5 jsou nezávisle vybrány ze skupin zahrnujících H-, CH3-, -CH2CH3, propyl, isopropyl, isobutyl, <i>ter</i>
      <i>c</i>-butyl CH3O- CH2CH3O-, propoxy, isopropoxy, isubutyloxy, <i>ter</i>
      <i>c</i>-butyloxy; a substituent Z je nezávisle vybrán z nezávislých struktur </p>
    <p num="44"> </p>
    <p num="45">
      <img id="i0004" he="63" wi="361" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0004"/>
      <br/>
    </p>
    <p num="46"> </p>
    <p num="47">kde q = 2 až 14 a r = 0 až 10 a s = 0 až 10 </p>
    <p num="48"> </p>
    <p num="49">včetně diastereomerů a směsí diastereomerů látky vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, </p>
    <p num="50"> </p>
    <p num="51">inkorporovanou do nanovláken tvořených polyesterem obecného vzorce II </p>
    <p num="52"> </p>
    <p num="53">
      <img id="i0005" he="95" wi="134" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0005"/>
      <br/>
      <br/>(II) </p>
    <p num="54"> </p>
    <p num="55">kde m je alespoň 1, kde n je alespoň 50 a R je -H nebo (C1-C10)alkyl </p>
    <p num="56"> </p>
    <p num="57">nebo jeho kopolymery, </p>
    <p num="58"> </p>
    <p num="59">nebo do nanovláken tvořených polyvinylalkoholem obecného vzorce III </p>
    <p num="60"> </p>
    <p num="61">
      <img id="i0006" he="115" wi="107" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0006"/>
      <br/>
      <br/>(III) </p>
    <p num="62"> </p>
    <p num="63">kde n je alespoň 50, </p>
    <p num="64"> </p>
    <p num="65">nebo do nanovláken tvořených kombinací polyesteru a polyvinylalkoholu. </p>
    <p num="66"> </p>
    <p num="67">Technické řešení dále předkládá nanovlákenný materiál, jak byl popsán výše, který obsahuje 2 až 20 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce (I). </p>
    <p num="68"> </p>
    <p num="69">Technické řešení dále předkládá nanovlákenný materiál, jak byl popsán výše, který výhodně obsahuje 2 až 10 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce (I). </p>
    <p num="70"> </p>
    <p num="71">Technické řešení dále předkládá nanovlákenný materiál, jak byl popsán výše, který výhodně obsahuje 2 až 5 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce (I). </p>
    <p num="72"> </p>
    <p num="73">Předmětem technického řešení je také nanovlákenný materiál, jak byl popsán výše, tvořený vlákny o průměru větším než 100 nm a menším než 5 μm. </p>
    <p num="74"> </p>
    <p num="75">Předkládán je rovněž nanovlákenný materiál popsaný výše k ošetření úrazové ztráty kožního krytu. </p>
    <p num="76"> </p>
    <p num="77">Předmětem technického řešení je i nanovlákenný materiál popsaný výše k léčbě akutních i chronických onemocněné kůže. </p>
    <p num="78"> </p>
    <p num="79">Předmětem technického řešení je také nanovlákenný materiál popsaný výše k aplikaci umělých kožních náhrad. </p>
    <p num="80"> </p>
    <p num="81">Předkládán je rovněž nanovlákenný materiál popsaný výše k léčbě infikovaných defektů rohovky. </p>
    <p num="82"> </p>
    <p num="83">Lipofosfonoxiny 3. generace podle vzorce I, mající vyšší aromaticitu (větší počet aromatických skupin) v hydrofobním řetězci výhodně vykazují velmi nízkou hemolytickou aktivitu. </p>
    <p num="84"> </p>
    <p num="85">Pro dosažení účinku technického řešení v případě použití polyesteru jsou klíčové substituenty R tvořené hydrofobními skupinami. </p>
    <p num="86"> </p>
    <p num="87">Polyestery obecného vzorce </p>
    <p num="88"> </p>
    <p num="89">
      <img id="i0007" he="98" wi="132" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0007"/>
      <br/>
      <br/>(II) </p>
    <p num="90"> </p>
    <p num="91">kde m nabývá hodnoty alespoň 1, a R je -H nebo (C1-C10)alkyl, </p>
    <p num="92"> </p>
    <p num="93">nebo jejich kopolymery, obsahující ve své molekule taktéž hydrofobní uhlovodíkový řetězec, a látky patřící do skupiny lipofosfonoxinů 3. generace (LEGO-LPPO), jejichž molekula obsahuje jak hydrofilní, tak hydrofobní část, </p>
    <p num="94"> </p>
    <p num="95">se tedy svou hydrofobní částí molekuly k řetězcům polyesterů velmi pevné váží působením nekovalentních interakcí. Výsledkem je materiál, u kterého nedochází k uvolňování léčiva mechanismem prosté difúze. Bylo experimentálně potvrzeno, že ani po pěti dnech nedochází ve vodném prostřední k uvolnění detekovatelného množství LEGO-LPPO do roztoku v případě materiálů výhodně s obsahem 2 až 5 % hmotnostních LEGO-LPPO. LEGO-LPPO se může v tomto případě uvolňovat pouze degradací polymerního materiálu, specificky jeho hydrolytickým rozkladem. Polyestery jsou vůči samovolné hydrolýze ve vodném prostředí relativně odolné, k měřitelnému rozpadu dochází v řádu měsíců či roků. Naproti tomu jsou náchylné k enzymatické hydrolýze, například působením lipáz. Ve vodném prostředí obsahujícím lipázy dochází tedy k degradaci polymeru a uvolňování inkorporovaného léčiva, jehož rychlost je přímo úměrná enzymatické aktivitě v roztoku. </p>
    <p num="96"> </p>
    <p num="97">V případě nanomateriálu s obsahem LEGO-LPPO vyšším než 5 <i>%</i> hmotnostních dochází k uvolnění ve dvou fázích. Nejprve rychle prostou difúzí a poté pomalu rozkladem nanomateriálu. Této vlastnosti lze s výhodou využít k rychlé sterilizaci rány (prvotní uvolnění difúzí) a následně k dlouhodobému udržení sterility rány pomalým uvolněním z degradujícího nanomateriálu (často urychlené přítomností bakterií). </p>
    <p num="98"> </p>
    <p num="99">Při aplikaci materiálů na bázi polyesterů nesoucích LEGO-LPPO při topické terapii infekčních onemocnění kůže se dostavuje účinek, který se u terapeutických systémů tvořených polymerními nanovlákny nesoucími léčivo dle stavu techniky nepozorujeme. V místě infekce je vlivem zvýšené orgánové odpovědi organismu a vlivem působení bakterií zvýšená aktivita lipáz a jiných hydrolytických enzymů. LEGO-LPPO se tedy uvolňuje rychlostí úměrnou intenzitě reakce tkáně v místě působení. Naopak po odeznění infekce a utlumení zánětlivé imunitní reakce organismu v místě působení dochází k útlumu až k zastavení uvolňování inkorporovaného LEGO-LPPO z materiálu. </p>
    <p num="100"> </p>
    <p num="101">Experimenty monitorující úbytek hmotnosti materiálu na bázi polyesteru, konkrétně PCL, nesoucího LEGO-LPPO v koncentraci do 10 % hmotnostních porovnáním s kontrolními vzorky v podobě čistého PCL a PCL nesoucího L-arginin ukázaly, že ve vodném prostředí nedochází k měřitelnému uvolňování LEGO-LPPO do roztoku. Naproti tomu u vzorku nesoucího L-arginin došlo k významnému úbytku hmotnosti, jelikož nevytváří pevné vazby s řetězci polyesterů, a je tedy náchylný k uvolňování mechanismem prosté difúze. Dále bylo prokázáno, že ve vodném prostředí v přítomnosti lipázy dochází k výraznému hmotnostnímu úbytku testovaného materiálu, přičemž vzorek obsahující LEGO- LPPO prokázal nejvyšší rychlost degradace ze všech tří vzorků. Vlastnosti LEGO-LPPO tedy přispívají ke zvýšení degradačního účinku hydrolytických enzymů na polyesterová vlákna, což přispívá ke snazšímu uvolnění léčiva při terapiích. </p>
    <p num="102"> </p>
    <p num="103">Vhodné formy terapeutických přípravků na bázi polyesterových vláken nesoucích LEGO-LPPO jsou nanovlákenné netkané textilie tvořené vlákny výhodně o průměru menším než 5 μm a s rozdělovací funkcí (s hustotou pravděpodobnosti) sahající až ke stovkám nanometrů. Tyto mohou sloužit jako aktivní krycí materiál pro prevenci rozvoje rané infekce, příkladně u pooperačních ran, invazivních vstupů či po transplantaci kůže. Dále je možné je použít při ošetření úrazové ztráty kožního krytu, příkladně popálenin, či při léčbě akutních i chronických onemocnění kůže, příkladně ischemických kožních defektů, bércových vředů nebo u diabetické nohy. </p>
    <p num="104"> </p>
    <p num="105">Výše zmíněné textilie najdou dále uplatnění jako sekundární krytí umělých kožních náhrad, jelikož brání vzniku infekce, přičemž ani jedna ze složek, tedy polyester a LPPO-3 při použitých koncentracích, není toxický vůči kožním buňkám a nebrání jejich množení. </p>
    <p num="106"> </p>
    <p num="107">Výhodou použití LPPO třetí generace je to, že na rozdíl od LPPO druhé generace přítomnost sérových albuminů nesnižuje jejich antibakteriální aktivitu. </p>
    <p num="108"> </p>
    <p num="109">Další vhodnou formulací pro topické terapie jsou gely obsahující polyesterová nanovlákna nesoucí LEGO-LPPO, které mohou být vhodné příkladně v oftalmologii při léčbě infikovaných defektů rohovky. </p>
    <p num="110"> </p>
    <p num="111">Spojení polyesterů a LEGO-LPPO pro výrobu krycích materiálů k terapeutické aplikaci je vhodné taktéž proto, že obě složky mají vysokou stabilitu vůči vysokým teplotám a působení UV záření, a umožňují tedy snadnou sterilizaci před použitím v terapii. </p>
    <p num="112"> </p>
    <p num="113">Samotná výroba polyesterových nanovláken s inkorporovanými LEGO-LPPO je možná jednoduchou základní metodou stejnosměrného elektrostatického zvlákňování ze směsi obsahující roztok žádaného polymeru a LEGO-LPPO. Není tedy nutné použití komplikovanějších, a tedy i dražších, metod výroby, které jsou dle stavu techniky nutné pro výrobu vláken s řízeným uvolňováním léčiva. </p>
    <p num="114"> </p>
    <p num="115"> </p>
    <p num="116">Objasnění výkresů </p>
    <p num="117"> </p>
    <p num="118">Obr. 1. znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu z PCL. </p>
    <p num="119">Obr. 2. znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu z PCL s obsahem 2 % hmotnostních LEGO-LPPO <b>5</b> z Příkladu 3. </p>
    <p num="120">Obr. 3. znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu z PCL s obsahem 5 % hmotnostních LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="121">Obr. 4. znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu z PCL s obsahem 10 % hmotnostních LEGO-LPPO <b>5 </b>z příkladu 3. </p>
    <p num="122">Obr. 5 znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu PVA. </p>
    <p num="123">Obr. 6 znázorňuje snímek z elektronové mikroskopie, měřítko 20 μm (A) a histogram průměrů vláken (B) materiálu PVA s obsahem 5 % hmotnostních LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="124">Příklady uskutečnění technického řešení </p>
    <p num="125"> </p>
    <p num="126">Seznam uvedených zkratek: </p>
    <p num="127"> </p>
    <p num="128">DCM  dichlormethan </p>
    <p num="129">TPSCI  triisopropylbenzensulfonylchlorid </p>
    <p num="130">IR  infračervené spektrum </p>
    <p num="131">HR-ESI  hmotnostní spektrum ve vysokém rozlišení, používající elektronspray ionizaci </p>
    <p num="132">HR-EI  hmotnostní spektrum ve vysokém rozlišení, používající elektronimpakt  ionizaci </p>
    <p num="133">n-BuOH  n-butylalkohol </p>
    <p num="134">DMTr  dimethoxytrityl </p>
    <p num="135">THF  tetrahydrofuran </p>
    <p num="136">MIC  minimální inhibiční koncentrace </p>
    <p num="137">EC50  střední účinná (efektivní) koncentrace (vyvolávající 50 % maximálního účinku) </p>
    <p num="138">IC50  inhibiční koncentrace (vyvolávající 50 % maximálního inhibičního účinku) </p>
    <p num="139">rpm  otáčky za minutu </p>
    <p num="140">rt  teplota místnosti </p>
    <p num="141">h  hodina </p>
    <p num="142">MIC  minimální inhibiční koncentrace </p>
    <p num="143">CFU  jednotky vytvářející kolonie (colony forming  units) </p>
    <p num="144">NEP  (2-chlor-5,5-dimethyl-l,3,2-dioxafosfinan 2-oxid) </p>
    <p num="145">MOP  (4-methoxypyridin 1-oxid) </p>
    <p num="146">TEAB  tetraethylammonium bromid </p>
    <p num="147">NMR  nukleární magnetická rezonance </p>
    <p num="148">HRMS  hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením </p>
    <p num="149">TLC  chromatografie na tenké vrstvě </p>
    <p num="150"> </p>
    <p num="151">Schéma 1. Syntéza LEGO-LPPO z příkladu 3 </p>
    <p num="152"> </p>
    <p num="153">
      <img id="i0008" he="144" wi="354" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0008"/>
      <br/>
    </p>
    <p num="154">
      <b>i. 1</b>
      <b>.</b>
      <b> </b>
      <b>oktanol, NEP, MOP, pyridin; 2. </b>
      <b>60%</b>
      <b> </b>
      <b>aq</b>
      <b>. pyridin, 60 °C; </b>
      <b>ii</b>
      <b>. hexan-</b>
      <b>1,6-diol</b>
      <b>, NEP, MOP, pyridin; </b>
      <b>iii</b>
      <b>. BBTADP, n-</b>
      <b>BuOH</b>
      <b>, 105 °C; </b>
      <b>iv</b>
      <b>. 0.5 mol.</b>
      <b>l</b>
      <b>-1</b>
      <b> </b>
      <b>HC</b>
      <b>l</b>
      <b>/</b>
      <b>MeOH</b>
    </p>
    <p num="155">
      <br/>
    </p>
    <p num="156">
      <b>Příklad 1: </b>
      <b>Monooktyl</b>
      <b> </b>
      <b>vinylfosfonát</b>
    </p>
    <p num="157"> </p>
    <p num="158">Směs monomethyl vinylfosfonátu (<b>1</b>, 1,37 g, 11,2mmol), 1-oktanolu (2,6 ml, 16,6 mmol), a MOP (296 mg, 2,25 mmol) se vysuší kodestilací s toluenem (50 ml) a pyridinem (50 ml) a rozpustí v pyridinu (90 ml). NEP (5,34 g, 28,1 mmol) se přidá do reakční směsi a reakce se míchá pod argonovou atmosférou 3 h. Reakční směs se zahustí na vakuové odparce, rozpustí v toluenu (250 ml) a extrahuje s 2 mol.l-1 TEAB (250 ml). Vodná fáze se vytřepe s toluenem (250 ml). Spojené organické fáze se vysuší bezvodým síranem sodným, odpaří a nanese na kolonu silikagelu (100 g). Produkt se získá sloupcovou chromatografií za použití lineárního gradientu acetonu v toluenu. Frakce obsahující produkt (TLC) se spojí a odpaří na vakuové odparce. Zbytek se rozpustí v ethyletheru, vzniklý precipitát se odfiltruje pomocí frity a sloupce křemeliny. Filtrát se odpaří na vakuové odparce, získaný olej se rozpustí v pyridinu (52 ml), přidá se voda (35 ml) a tato směs se zahřívá na 60 °C přes noc. Reakční směs se zahustí na vakuové odparce, rozpustí v 50% (obj./obj.) vodném ethanolu a přefiltruje přes kolonu naplněnou ionexem DOWEX50 (H+ forma, 110 ml). Kolona se promyje ethanolem (100 ml). Získaný roztok se odpaří na vakuové odparce za vzniku žádaného produktu v 81% celkovém výtěžku (2,00 g, 9,08 mmol) ve formě bezbarvého oleje. 1H, l3C, a 31P NMR spektra, HRMS, a IR se shodují s publikovanými daty. </p>
    <p num="159"> </p>
    <p num="160">
      <b>Příklad 2: Hexan-</b>
      <b>1,6-diyI</b>
      <b> </b>
      <b>dioktyl</b>
      <b> bis(</b>
      <b>vinylfosfonát</b>
      <b>)</b>
    </p>
    <p num="161"> </p>
    <p num="162">Směs monooktyl vinylfosfonátu (látka z příkladu 1) (2,00 g, 9,08 mmol), hexan-1,6-diolu (97%, 369 mg, 3,03 mmol) a MOP (159 mg, 1,21 mmol) se kodestiluje s pyridinem (2x50 ml). Odparek se rozpustí v pyridinu (30 ml) a přidá se NEP (2,30 g, 12,1 mmol). Reakční směs se míchá v atmosféře argonu při teplotě místnosti 2 h. Reakční směs se zahustí na vakuové odparce, rozpustí v chloroformu (50 ml) a vytřepe s 2 mol.l-1 TEAB (30 ml) a vodná fáze se vytřepe chloroformem (50 ml). Spojená organická fáze se vysuší pomocí bezvodého síranu sodného, přefiltruje a odpaří na vakuové odparce. Produkt se získá sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu acetonu v toluenu v 87% výtěžku (1,37 g, 2,63 mmol,) ve formě bezbarvého oleje. 1H, l3C, a 31P NMR spektra, HRMS, a IR spektra jsou identická s publikovanými daty. </p>
    <p num="163"> </p>
    <p num="164">
      <b>Příklad 3:</b>
      <b> </b>
      <b>Hexan-1,6-diyl </b>
      <b>dioktyl</b>
      <b> bis((2-(bis(3-aminopropyl)</b>
      <b>amino</b>
      <b>)</b>
      <b>ethyl</b>
      <b>)</b>
      <b>fosfonát</b>
      <b>)</b>
    </p>
    <p num="165">
      <b>H</b>
      <b>exahydrochlorid</b>
    </p>
    <p num="166"> </p>
    <p num="167">Provede se Michaelova adice bis(3-<i>ter</i>
      <i>c</i>-butyloxykarbonylaminopropyl)aminu na hexan-1,6-diyl dioktyl bis(vinylfosfonát) (látku z příkladu 2) a následné odstranění Boc chránících skupin. Žádaný produkt (<b>5</b>) se získá v 31% celkovém výtěžku (1,74 g, 1,74 mmol) ve formě bílé amorfní látky. 1H, 13C, a 31P NMR spektra, HRMS a IR spektra jsou identická s publikovanými daty. </p>
    <p num="168"> </p>
    <p num="169">Příklad 4 popisuje přípravu nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polykaprolaktonu (PCL) nesoucího 0 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="170"> </p>
    <p num="171">K rozpouštědlovému systému chloroform:ethanol 8:2 se přidá polykaprolakton o střední molekulové hmotnosti 45 000 a koncentraci 16 % hmotn. vzhledem k rozpouštědlu. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 60 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 180 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="172"> </p>
    <p num="173">Příklad 5 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polykaprolaktonu (PCL) nesoucího 2 % LEGO-LPPO 5 z příkladu 3. </p>
    <p num="174"> </p>
    <p num="175">V rozpouštědlovém systému chloroform:ethanol 8:2 se disperguje zvolený LPPO. Množství se zvolí tak, aby LPPO následně tvořilo 2 % hmotn. v sušině vzhledem k polymeru. Dále se do suspenze přidá polykaprolakton o střední molekulové hmotnosti 45 000 a koncentraci 16 hmotn. % vzhledem k rozpouštědlu. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 60 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 180 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="176"> </p>
    <p num="177">Příklad 6 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polykaprolaktonu (PCL) nesoucího 5 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="178"> </p>
    <p num="179">V rozpouštědlovém systému chloroform:ethanol 8:2 se disperguje zvolený LEGO-LPPO. Množství se zvolí tak, aby LEGO-LPPO následně tvořilo 5 % hmotn. v sušině vzhledem k polymeru. Dále se do suspenze přidá polykaprolakton o střední molekulové hmotnosti 45 000 a koncentraci 16 <i>%</i> hmotn. vzhledem k rozpouštědlu. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 60 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 180 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="180"> </p>
    <p num="181">Příklad 7 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polykaprolaktonu (PCL) nesoucího 10 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="182"> </p>
    <p num="183">V rozpouštědlovém systému chloroform:ethanol 8:2 se disperguje zvolený LEGO-LPPO. Množství se zvolí tak, aby LEGO-LPPO následně tvořilo 10 hmotn. <i>%</i> v sušině vzhledem k polymeru. Dále se do suspenze přidá polykaprolakton o střední molekulové hmotnosti 45 000 a koncentraci 16 % hmotn. vzhledem k rozpouštědlu. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 60 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 180 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="184"> </p>
    <p num="185">Příklad 8 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polyvinylalkoholu (PVA) nesoucího 0 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="186"> </p>
    <p num="187">Zvlákňovací roztok se připraví tak, aby rozpouštědlo voda:ethanol bylo ve výsledném poměru 9:1 a použitý polyvinylakohol (PVA, molekulová hmotnost 125 000, stupeň hydrolýzy 98 <i>%</i>) činil 10 % hmotnostních. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 50 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 190 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="188"> </p>
    <p num="189">Příklad 9 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi tepelně stabilizovaného polyvinylalkoholu (PVA) nesoucího 0 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="190"> </p>
    <p num="191">Nanovlákenný materiál se nastříhá a vloží do skleněných misek. Na materiály se působí teplotou 150 až 180 °C po dobu 1 až 4 hodiny, dle požadované míry stabilizace. Takto stabilizované materiály se sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="192"> </p>
    <p num="193">Příklad 10 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymerního materiálu na bázi polyvinylalkoholu (PVA) nesoucího 5 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="194"> </p>
    <p num="195">Zvlákňovací roztok se připraví tak, aby rozpouštědlo voda i ethanol bylo ve výsledném poměru 9:1, použitý polyvinylakohol (PVA, molekulová hmotnost 125 000, stupeň hydrolýzy 98 %) činil 10 % hmotn. a zvolený LPPO v takovém množství, aby byl vůči polymeru v požadovaném poměru (5 <i>%</i> hmotn.). V destilované vodě se rozpustí zvolený LEGO-LPPO. Množství se zvolí tak, aby LEGO-LPPO následně tvořil 5 % hmotn. v sušině vzhledem k polymeru (PVA). V rozpouštědlovém systému voda:ethanol se rozpustí PVA. Vodný roztok LEGO-LPPO se přidá do předem vyrobeného roztoku PVA a homogenizuje. Materiál se zvlákňuje na stroji Nanospider NS 1WS500U (Elmarco, Česká republika) při potenciálovém rozdílu mezi elektrodou a kolektorem 50 kV s kladným nábojem přivedeným na elektrodu a záporným na kolektor. Vzdálenost mezi elektrodou a kolektorem je 190 mm. Vyrobené vzorky se posléze sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="196"> </p>
    <p num="197">Příklad 11 popisuje postup přípravy nanovlákenného polymemího materiálu na bázi tepelně stabilizovaného polyvinylalkoholu (PVA) nesoucího 5 % LEGO-LPPO <b>5</b> z příkladu 3. </p>
    <p num="198"> </p>
    <p num="199">Nanovlákenný materiál připravený se nastříhá a vloží do skleněných misek. Na materiály se působí teplotou 150 až 180 °C po dobu 1 až 4 hodiny, dle požadované míry stabilizace. Takto stabilizované materiály se sterilizují ethylen oxidem při teplotě místnosti. </p>
    <p num="200"> </p>
    <p num="201">
      <b>Příklad 12</b> popisuje experiment monitorující uvolňování LPPO z polymerního materiálu na bázi PVA prostou difúzí. </p>
    <p num="202"> </p>
    <p num="203">Z nanovlákenných materiálů na bázi PVA vyrobených postupem popsaným v příkladech 8, 9 a 10 se připraví (nastříhají) vzorky o hmotnosti 50 mg; tři vzorky od každého testovaného materiálu. Každý vzorek se vloží do 15 ml zkumavky a přidá se k němu 5 ml fosfátového pufru (PBS, pH 7,4). Všechny vzorky se následně inkubují při 37 °C po dobu 7 dní, přičemž se v následujících intervalech odebírá pro analýzu alikvot 200 μl inkubačního média. Odebraný alikvot je ihned nahrazen stejným množstvím fosfátového pufru (PBS, pH 7,4). Alikvoty se odebírají po 1,4, 8, 12, 24, 48, 72 a 168 hodinách inkubace. Odebrané médium se analyzuje metodou HPLC ke stanovení koncentrace uvolněného LPPO. </p>
    <p num="204"> </p>
    <p num="205">Příklad 13 popisuje experiment monitorující enzymatickou degradaci polymerního materiálu na bázi PCL nesoucího LEGO-LPPO. </p>
    <p num="206"> </p>
    <p num="207">Z nanovlákenných materiálů na bázi PCL vyrobených postupem popsaným v příkladech 4, 5, 6 a 7 se připraví (nastříhají) vzorky o hmotnosti 50 mg. Od každého testovaného materiálu tři vzorky pro degradaci a dále jeden vzorek jako negativní kontrola. Každý vzorek se vloží do zkumavky o objemu 15 ml a přidá se k němu 5 ml fosfátového pufru (PBS, pH 7,4), obsahujícího enzym lipázu z Pseudomonas cepacia (30 U/ml). Negativní kontroly se vloží do zkumavky o objemu 15 ml a přidá se k nim 5 ml fosfátového pufru (PBS, pH 7,4). Všechny vzorky se následně inkubují při 37 °C po dobu 5 dní, přičemž se každých 24 h inkubační médium vymění za čerstvé a odebrané médium se analyzuje metodou HPLC ke stanovení koncentrace uvolněného LPPO. Po uplynutí inkubační doby se vzorky vyjmou, opláchnou v destilované vodě a vysuší do konstantní hmotnosti. U vysušených vzorků se provede hmotnostní analýza, analýza morfologie v elektronovém mikroskopu a analýza molekulové hmotnosti polymeru metodou GPC. </p>
    <p num="208"> </p>
    <p num="209">Příklad 17 popisuje experiment zkoumající vliv polymerního materiálu na bázi PCL a PVA nesoucího LPPO z příkladu 3 na růst vybraných bakteriálních kmenů </p>
    <p num="210"> </p>
    <p num="211">Bakteriální kmeny (referenční): </p>
    <p num="212"> </p>
    <p num="213">
      <i>Staphylococcus aureus</i>
      <i> </i>
      <i>CCM 4223</i>
    </p>
    <p num="214">
      <i>Enlerococcus</i>
      <i> </i>
      <i>faecalis</i>
      <i> </i>
      <i>CCM 4224</i>
    </p>
    <p num="215">
      <i>Escherichia</i>
      <i> coli</i>
      <i> </i>
      <i>CCM 3954 </i>
    </p>
    <p num="216">
      <i>Pseudomonas</i>
      <i> aeruginosa</i>
      <i> </i>
      <i>CCM 3955</i>
    </p>
    <p num="217">
      <i>Candida </i>
      <i>albicans</i>
      <i> </i>
      <i>ATCC 90028</i>
    </p>
    <p num="218">
      <br/>
    </p>
    <p num="219">Postup: </p>
    <p num="220"> </p>
    <p num="221">Z čerstvě narostlých kolonií testovaných bakterií a kvasinky se připraví inokulum ve 2 ml fyziologického roztoku (pufrovaný fyziologický roztok 2 ml, 10 ks v balení 08034, TRIOS). Hustota inokula se upraví tak, aby zákal odpovídal hodnotě 0,5 dle McFarlandova zákalového standardu (zákaloměr DENSILAMETERII, Erba). Bakteriální suspenze se pomocí očkovacího stolku nanesou na MH agar (Mueller Hinton agar. 120 ks balení 02011, Trios), kvasinková suspenze pak na GPA agar (Trios). Po zaschnutí se aplikují vzorky testované textilie o velikosti cca 1 cm2. Následuje inkubace při 35±1 °C po dobu 18±2 h. Metoda testování byla upravena podle ISO 20645 (ISO 20645 Textil fabrics - Determination of antibacterial activity - Agar diffusion plate test). </p>
    <p num="222"> </p>
    <p num="223">Případná přítomnost bakterií v nanovlákenné vrstvě po kultivaci se vyhodnotí pomocí počítání kolonií CFU/ml (pomocí tzv. spottingu). Po sejmutí z povrchu agaru se nanovlákenné vrstvy umístí do 1 ml fyziologického roztoku, důkladné rozmíchají na třepačce a naředí exponenciálně v mikrotitrační destičce (1 sloupec → 8 ředění). 10 μl z každé jamky se rozetře do jednotlivých řádků na MH agar, který se následně inkubuje při 35±1 °C po dobu 18±2 h. Výsledek se hodnotí řádově, detekční limit metody je 102 CFU/ml. </p>
    <p num="224"> </p>
    <p num="225">V tabulce 1 jsou uvedeny velikosti inhibičních zón kolem testovaných nanovlákenných vrstev, přítomnost zákalu a počet CFU/ml. V případě, že při spottingu (počítání kolonií) nebyla zaznamenána přítomnost bakteriálního růstu v žádném ředění, je v tabulce uvedena hodnota &lt; 102 CFU/ml vzhledem k detekčnímu limitu metody. Pokud bakterie rostly hustě i v posledním ředění, je v tabulce uvedena hodnota &gt; 109 CFU/ml. </p>
    <p num="226"> </p>
    <p num="227">Tabulka 1. Velikosti inhibičních zón v mm kolem testovaných nanovlákenných vrstev a přítomnost bakteriálního růstu pod nanovlákennou vrstvou (+ pozitivní růst; - negativní růst; (+) velmi diskrétní růst/povlak pod sejmutou nanovlákennou vrstvou) v CFU (colony forming units)/ml, % látky jsou hmotnostní. </p>
    <p num="228"> </p>
    <p num="229">
      <img id="i0009" he="156" wi="400" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0009"/>
      <br/>
      <img id="i0010" he="160" wi="386" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait" file="img0010"/>
      <br/>
    </p>
    <p num="230">*TS: tepelné stabilizovaný </p>
    <p num="231"> </p>
    <p num="232">K úplné inhibici bakteriálního růstu dojde v případě vzorku č. 4 u všech testovaných bakterií. Vzorek č. 7 má stejný účinek v případě S. aureus, E. faecalis a E. coli. U vzorků 2 a 3 dojde ke snížení bakteriálního růstu s různou intenzitou v závislosti na testované bakterii (minimální v případě P. aeruginosa u vzorku č. 3). </p>
    <p num="233"> </p>
    <p num="234"> </p>
    <p num="235">Průmyslová využitelnost </p>
    <p num="236"> </p>
    <p num="237">Polyesterová nanovlákna s inkorporovanými léčivy na bázi lipofosfonoxinů třetí generace jsou využitelná jakožto materiál pro výrobu netkaných textilií a gelů pro topickou terapii infekčních onemocnění kůže a ošetření popálenin. </p>
  </description>
  <claims id="claim">
    <claim num="1">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že sestává z lipofosfonoxinu obecného vzorce I
   <img file="2568973eg0uueznyqm6uqnjxj.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="135" he="142"/>
        <br/>(I),kde substituent X je zvolen z:
   <img file="2568973ka1q7xl09hom6uqopq9.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="432"/>kde m = 1 až 3;
   <br/>substituent Y
   <sub>1</sub> a Y
   <sub>2</sub> je nezávisle zvolen z:
   <img file="2568973yk20i9v12oem6uqp23x.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="468" he="164"/>
        <br/>
        <br/>kde n = 0 až 12 a o = 0 až 12 a p = 0 až 12 a kde R
   <sub>1</sub>, R
   <sub>2</sub>, R
   <sub>3</sub>, R
   <sub>4</sub>, a R
   <sub>5</sub> jsou nezávisle zvoleny z H-, CH3-, -CH2CH3, propylu, isopropylu, isobutylu, 
   <i>terc</i>-butylu, CH
   <sub>3</sub>O-, CH
   <sub>2</sub>CH
   <sub>3</sub>O-, propoxy, isopropoxy, isobutyloxy a 
   <i>ter</i>
        <i>t</i>-butyloxy skupiny;
   <br/>a substituent Z je nezávisle zvolen z:
   <img file="2568973fii3m8fhtbjm6uqpfvc.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="481" he="84"/>kde q = 2 až 14, r = 0 až 10 a s = 0 až 10;nebo z diastereomerů a směsi diastereomerů lipofosfonoxinu vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů,inkorporovaného do nanovláken zvolených z polyesteru obecného vzorce II
   <img file="2568973ifxzgmtrebm6uqpxcp.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="176" he="131"/>
        <br/>(II)kde m je alespoň 1, n je alespoň 50 a R je -H nebo (C
   <sub>1</sub>-C
   <sub>10</sub>)alkyl,
   <br/>nebo jeho kopolymerů,
   <br/>nebo do nanovláken polyvinylalkoholu obecného vzorce III
   <img file="2568973nfj6wxwwomjm8edaxlg.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="201" he="229"/>
        <br/>(III)kde n je alespoň 50,
   <br/>nebo do nanovláken tvořených kombinací polyesteru obecného vzorce II a polyvinylalkoholu obecného vzorce III.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="2">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že substituent Y1 a Y2 je nezávisle zvolen z:
   <img file="25689738pulymsn82lm6uqqldt.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="355" he="175"/>kde n, o, p, R
   <sub>1</sub>, R
   <sub>2</sub>
        <sub> </sub>a R
   <sub>3</sub> jsou jak je popsáno v nároku 1, výhodně R
   <sub>1</sub>, R
   <sub>2</sub>, R
   <sub>3</sub> jsou H nebo methyl.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="3">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že substituent X je zvolen z:
   <img file="2568973mfqn2kx08xm6uqqve6.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="217" he="139"/>kde m je 1 až 3
   <br/>a substituent Z je
   <img file="2568973s0f5vs3o9gkm6uqr6l8.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="129" he="68"/>kde q je 4 až 14.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="4">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že obsahuje 2 až 20 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce I.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="5">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že obsahuje 2 až 10 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce I.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="6">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že obsahuje 2 až 5 % hmotnostních lipofosfonoxinu podle vzorce I.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="7">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1, 
   <b>vyznačující se tím</b>, že je tvořený vlákny o průměru větším než 100 nm a menším než 5 μm.
  </claim-text>
    </claim>
    <claim num="8">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1 pro použití k ošetření úrazové ztráty kožního krytu.</claim-text>
    </claim>
    <claim num="9">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1 pro použití k léčbě akutních i chronických onemocnění kůže.</claim-text>
    </claim>
    <claim num="10">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1 pro použití k aplikaci umělých kožních náhrad.
   <br/>
        <br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim num="11">
      <claim-text>Nanovlákenný materiál podle nároku 1 pro použití k léčbě infikovaných defektů rohovky.</claim-text>
    </claim>
  </claims>
  <drawings id="draw">
    <figure num="1">
      <img file="2568973img0010.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="399" he="472"/>
    </figure>
    <figure num="2">
      <img file="2568973img0011.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="506"/>
    </figure>
    <figure num="3">
      <img file="2568973img0012.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="454" he="550"/>
    </figure>
    <figure num="4">
      <img file="2568973img0013.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="479"/>
    </figure>
    <figure num="5">
      <img file="2568973img0014.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="453" he="550"/>
    </figure>
    <figure num="6">
      <img file="2568973img0015.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="466"/>
    </figure>
    <figure num="7">
      <img file="2568973img0016.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="447" he="550"/>
    </figure>
    <figure num="8">
      <img file="2568973img0017.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="483"/>
    </figure>
    <figure num="9">
      <img file="2568973img0018.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="454" he="550"/>
    </figure>
    <figure num="10">
      <img file="2568973img0019.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="470"/>
    </figure>
    <figure num="11">
      <img file="2568973img0020.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="444" he="545"/>
    </figure>
    <figure num="12">
      <img file="2568973img0021.jpg" img-content="drawing" img-format="jpg" wi="550" he="468"/>
    </figure>
  </drawings>
</ep-patent-document>
