<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ep-patent-document SYSTEM "OpenDataPatent_cz.dtd">
<ep-patent-document lang="en" file="OpendataIPOCZ_PT_DIFF_PUV2022-39681.xml" country="CZ" doc-number="35868" kind="U1">
  <bibliographic-data country="CZ">
    <publication-reference>
      <document-id>
        <country>CZ</country>
        <doc-number>35868</doc-number>
        <kind>U1</kind>
        <date>2022-03-22</date>
      </document-id>
    </publication-reference>
    <classifications-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="1">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>13</main-group>
        <subgroup>12</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>F</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="2">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>24</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="3">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>44</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="4">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>62</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
      <classification-ipcr sequence="5">
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>70</subgroup>
        <ipc-version-indicator>
          <date>20060101</date>
        </ipc-version-indicator>
        <classification-level>A</classification-level>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
      </classification-ipcr>
    </classifications-ipcr>
    <classifications-cpc>
      <classification-cpc sequence="1">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>13</main-group>
        <subgroup>124</subgroup>
        <symbol-position>F</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="10">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2300</main-group>
        <subgroup>608</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="11">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>703</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="12">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>K</subclass>
        <main-group>9</main-group>
        <subgroup>0048</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="2">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>13</main-group>
        <subgroup>00029</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="3">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20160801</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>F</subclass>
        <main-group>13</main-group>
        <subgroup>00017</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="4">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>24</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="5">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>44</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="6">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>15</main-group>
        <subgroup>62</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>I</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="7">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2400</main-group>
        <subgroup>12</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="8">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2300</main-group>
        <subgroup>236</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
      <classification-cpc sequence="9">
        <cpc-version-indicator>
          <date>20130101</date>
        </cpc-version-indicator>
        <section>A</section>
        <class>61</class>
        <subclass>L</subclass>
        <main-group>2300</main-group>
        <subgroup>406</subgroup>
        <symbol-position>L</symbol-position>
        <classification-value>A</classification-value>
        <action-date>
          <date>20220228</date>
        </action-date>
        <generating-office>
          <country>CZ</country>
        </generating-office>
        <classification-status>B</classification-status>
        <classification-data-source>H</classification-data-source>
      </classification-cpc>
    </classifications-cpc>
    <application-reference>
      <document-id>
        <country>CZ</country>
        <doc-number>2022-39681</doc-number>
        <date>2022-02-18</date>
      </document-id>
    </application-reference>
    <language-of-filing>cs</language-of-filing>
    <language-of-publication>cs</language-of-publication>
    <priority-claims>
      <priority-claim sequence="1" kind="national">
        <country>CZ</country>
        <date>2022-02-18</date>
      </priority-claim>
    </priority-claims>
    <invention-title lang="CS">Vrstvený nanovlákenný výrobek</invention-title>
    <invention-title lang="EN">Laminated nanofibre product</invention-title>
  </bibliographic-data>
  <description id="desc" lang="cs">
    <p num="1">
      <b>Vrstvený nanovlákenný výrobek</b>
    </p>
    <p num="2"> </p>
    <p num="3"> </p>
    <p num="4">Oblast techniky </p>
    <p num="5"> </p>
    <p num="6">Předkládané technické řešení spočívá ve vytvoření vrstveného nanovlákenného výrobku pro překrytí oka uživatele (člověka/zvířete) za účelem fyzikálně-chemické ochrany oka uživatele před kontaminací bakteriemi, viry a dalšími částicemi či molekulami a/nebo za účelem zlepšení regenerace poškozené tkáně uživatele, kde vrstvený nanovlákenný výrobek obsahuje alespoň jednu nanovlákennou vrstvu schopnou řízeně uvolňovat aktivní látky. Díky možnostem řízeného dlouhodobého uvolňování aktivních látek a povrchové nanovlákenné chemii a morfologii prezentované technické řešení urychluje a zlepšuje proces hojení poškozené tkáně uživatele. </p>
    <p num="7"> </p>
    <p num="8"> </p>
    <p num="9">Dosavadní stav techniky </p>
    <p num="10"> </p>
    <p num="11">Poranění a onemocnění oka a úkony jako jsou např. záněty, poleptání, mechanické poškození alespoň části oka a přilehlých tkání, degenerativní onemocnění, ošetření po provedeném zákroku oka a další jsou v současnosti na tomto orgánu řešeny v současnosti nedostatečně, a to zejména periodickým zakapáváním/mazáním oka doporučenou medikací. Vzhledem k citlivosti oka, jeho neustálému vlhčení slzami, mechanickému otírání víčkem a podobně není možné dlouhodobě, řízeně a kontinuálně dodávat oku potřebné aktivní látky obsažené v medikaci, což může značně komplikovat, prodlužovat léčbu a snížit tak i kvalitu celkové léčby. </p>
    <p num="12"> </p>
    <p num="13">Ve stavu techniky tedy vzniká potřeba výrobku, který lze jednoduše, biologicky bezpečně, levně a funkčně použít pro překrytí oka a který urychluje epitelizaci oblasti rány a další regeneraci poškozené tkáně. Cílem tohoto technického řešení je naplnit výše uvedenou potřebu. </p>
    <p num="14"> </p>
    <p num="15"> </p>
    <p num="16">Podstata technického řešení </p>
    <p num="17"> </p>
    <p num="18">Výše uvedený cíl předkládaného technického řešení je dosažen vrstveným nanovlákenným výrobkem pro překrytí oka uživatele (např. člověka nebo zvířete), který obsahuje alespoň jednu ochrannou nanovlákennou vrstvu z kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) a alespoň jednu terapeutickou nanovlákennou vrstvu z kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) a s obsahem gentamicinu v rozmezí 1 až 40 % (hmotn./hmotn.), výhodně v rozmezí 15 až 25 % (hmotn./hmotn.), výhodněji v rozmezí 19 až 21 % (hmotn./hmotn.), a nejvýhodněji 20 % (hmotn./hmotn.). Terapeutická nanovlákenná vrstva je na straně výrobku uzpůsobené jako přiléhající k oku. </p>
    <p num="19"> </p>
    <p num="20">Ve výhodném provedení může být kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) polyvinylacetát částečně hydrolyzovaný na polyvinylalkohol, zejména se stupněm hydrolýzy 80 až 95 mol. %, výhodně 85 až 90 mol. %, výhodněji 87 až 89 mol. %, a nejvýhodněji 88 mol. %. Stupeň hydrolýzy 100 mol. % znamená, že polyvinylacetát je úplně hydrolyzovaný na polyvinylalkohol. </p>
    <p num="21"> </p>
    <p num="22">Ve výhodném provedení může být kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) směs prvního kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 1 až 10 mPa.s, výhodně 4 až 6 mPa.s, např. 5 mPa.s, a druhého kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 35 až 45 mPa.s, výhodně 39 až 41 mPa.s, např. 40 mPa.s. Uvedené parametry viskozity jsou měřeny u 4% vodného roztoku daného kopolymeru při 20 °C dle norem DIN 53015 / JIS K 6726. </p>
    <p num="23"> </p>
    <p num="24">Terapeutická nanovlákenná vrstva dále může obsahovat kyselinu hyaluronovou v rozmezí 0,1 až 0,3 % (hmotn./hmotn.), např. 0,2 % (hmotn./hmotn.). Kyselina hyaluronová je v těle součástí extracelulární hmoty, a v terapeutické nanovlákenné vrstvě slouží jako podpůrná molekula pro stavbu extracelulární hmoty, a tudíž k regeneraci tkáně. </p>
    <p num="25"> </p>
    <p num="26">Pod hodnotami „% (hmotn./hmotn.)“ se rozumí hmotnostní podíl dané složky vzhledem k hmotnosti jedné terapeutické nanovlákenné vrstvy. </p>
    <p num="27"> </p>
    <p num="28">Vrstvený nanovlákenný výrobek sníží a/nebo zamezí další kontaminaci překrytého oka uživatele, jako je proniknutí organických a/nebo anorganických objektů do rány pacienta, např.: prachové částice, pyly, viry a/nebo bakterie. Výrobek může rovněž urychlovat hojení. Kontaminací je zde myšleno snížení počtu bakterií, virů, biologicky toxických látek a molekul případně dalších částic, jež mohou tkáň zanést nečistotami a/nebo při kontaktu s ošetřovanou tkání tkáň poškodit, jakožto např. chemickou reakcí. </p>
    <p num="29"> </p>
    <p num="30">Dále může být vrstvený nanovlákenný výrobek použit pro překrytí poranění, kde vlivem řízeného uvolňovaní aktivních látek, povrchovou morfologií a/nebo povrchovou chemií může výrobek zrychlit a/nebo zlepšit proces hojení.  </p>
    <p num="31"> </p>
    <p num="32">Díky uvolňovanému gentamicinu může být vytvořeno mikroklima bránící biologické kontaminaci těla pacienta, aniž by vícevrstvý produkt byl utěsněn na těle uživatele. </p>
    <p num="33"> </p>
    <p num="34">Vícevrstvý vrstvený nanovlákenný výrobek může disponovat unikátní možností vyměnit jednu nebo více vrstev vrstveného nanovlákenného výrobku, a to i během jeho užívání, čímž se rozšiřují možnosti optimalizace a přizpůsobení se vícevrstvého nosiče aktuálním požadavkům a potřebám uživatele a zároveň prodlužuje dobu použitelnosti vícevrstvého produktu před jeho nutnou výměnou. </p>
    <p num="35"> </p>
    <p num="36">Vrstvený nanovlákenný výrobek může být připraven procesem zvlákňování v elektrickém poli (např. metodou DC spinningu), přičemž na předem připravenou ochrannou nanovlákennou vrstvu může být připevněna alespoň jedna terapeutická nanovlákenná vrstva. </p>
    <p num="37"> </p>
    <p num="38"> </p>
    <p num="39">Objasnění výkresů </p>
    <p num="40"> </p>
    <p num="41">
      <b>Podstata technického řešení je dále objasněna na příkladech jeho uskutečnění, které jsou popsány s využitím připojených výkresů, kde:</b>
    </p>
    <p num="42"> </p>
    <p num="43">
      <b>Obr. 1 ilustruje vrstvený nanovlákenný výrobek s jednou ochrannou nanovlákennou vrstvou a jednou terapeutickou nanovlákennou vrstvou;</b>
    </p>
    <p num="44"> </p>
    <p num="45">
      <b>Obr. 2 ilustruje vrstvený nanovlákenný výrobek se dvěma ochrannými nanovlákennými vrstvami a jednou terapeutickou nanovlákennou vrstvou;</b>
    </p>
    <p num="46"> </p>
    <p num="47">
      <b>Obr. 3 ilustruje vrstvený nanovlákenný výrobek s jednou ochrannou nanovlákennou vrstvou a dvěma terapeutickými nanovlákennými vrstvami;</b>
    </p>
    <p num="48"> </p>
    <p num="49">
      <b>Obr. 4 ilustruje dvě snímky SEM analýzy u terapeutické nanovlákenné vrstvy dle prvního konkrétního příkladu s obsahem 19,9 % (hmotn./hmotn.) gentamicinu a 0,2 % (hmotn./hmotn.) kyseliny hyaluronové; a</b>
    </p>
    <p num="50"> </p>
    <p num="51">
      <b>Obr. 5a-5f ilustrují výsledky testování působení uvedené příkladné terapeutické nanovlákenné vrstvy na mikrobiologické kultury </b>
      <i>Micrococcus luteus</i> a <i>Bacillus subtilis</i>
      <b>.</b>
    </p>
    <p num="52"> </p>
    <p num="53"> </p>
    <p num="54">Příklady uskutečnění technického řešení </p>
    <p num="55"> </p>
    <p num="56">Dle výhodného provedení na obr. 1, vrstvený nanovlákenný výrobek může obsahovat alespoň dvě na sobě vrstvené nanovlákenné vrstvy, např. jednu ochrannou nanovlákennou vrstvu <u>3</u> a jednu terapeutickou nanovlákennou vrstvu <u>2</u>, které jsou z kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA), což je nanovlákenná struktura degradovatelná ve vodném prostředí a/nebo enzymaticky v živém organismu, kde alespoň jedna terapeutická nanovlákenná vrstva obsahuje antibiotikum gentamicin. </p>
    <p num="57"> </p>
    <p num="58">Materiálem vrstev může být kopolymer polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA), kde je polyvinylacetát částečně hydrolyzovaný na polyvinylalkohol se stupněm hydrolýzy kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) 80 až 95 mol. %, výhodně 85 až 90 mol. %, výhodněji 87 až 89 mol. %, nejvýhodněji 88 mol. %. Ve výhodném provedení může být kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) směs prvního kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 1 až 10 mPa.s, výhodně 4 až 6 mPa.s, např. 5 mPa.s, a druhého kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 35 až 45 mPa.s, výhodně 39 až 41 mPa.s, např. 40 mPa.s. Příkladné PVA kopolymery s viskozitou 5 mPa.s, resp. 40 mPa.s a stupněm hydrolýzy 88 mol. % se označují jako PVA 5-88, resp. PVA 40-88. Směs prvního a druhého kopolymeru může obecně být v poměru 1:99 až 99:1, např. 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20 nebo 90:10. </p>
    <p num="59"> </p>
    <p num="60">Rozpustnost/degradace terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u> obsahující gentamicin a tvořící stranu výrobku přiléhající k oku je ve vodném prostředí/v organismu, kde je výrobek aplikován, rychlejší než u ochranné nanovlákenné vrstvy <u>3</u> tvořící stranu výrobku nepřiléhající k oku. Ochranná nanovlákenná vrstva <u>3</u> tak plní ochrannou funkci vůči poškození a odstranění terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u> např. slzením, mrkáním a podobně. Navíc v průběhu rozpouštění se/degradace terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u> a díky ochranné nanovlákenné vrstvě <u>3</u> gentamicin setrvává v místě umístění vrstveného nanovlákenného výrobku mnohem déle a léčivý účinek je tak mnohem výraznější v porovnání s běžnými kapkami. Gentamicin může být řízeně uvolňován po dobu alespoň 8 hodin, nebo 24 hodin, nebo 48 hodin, nebo 72 hodin, nebo 120 hodin, nebo 240 hodin. </p>
    <p num="61"> </p>
    <p num="62">Terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> se ve vodném prostředí při teplotě 37 °C může rozpustit alespoň z 80 % v rozmezí od 8 hodin do 240 hodin, nebo od 8 hodin do 120 hodin. nebo od 8 hodin do 72 hodin, a obsahuje od 1 % do 40 % (hmotn./hmotn.) gentamicinu. </p>
    <p num="63"> </p>
    <p num="64">Dle obr. <u>2</u> může vícevrstvý nanovlákenný výrobek obsahovat dvě ochranné nanovlákenné vrstvy <u>3</u> a jednu terapeutickou nanovlákennou vrstvu <u>2</u>. </p>
    <p num="65"> </p>
    <p num="66">Dle obr. 3 může vícevrstvý nanovlákenný výrobek obsahovat jednu ochrannou nanovlákennou vrstvu <u>3</u> a dvě terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u>. </p>
    <p num="67"> </p>
    <p num="68">Ještě výraznějšího účinku léčby oka může být umístěním takovéhoto vrstveného nanovlákenného výrobku obsahujícího uvedené vrstvy, a i nadále ošetřované oko pacienta zakapávat léčivem. Léčivo je v takovém případě absorbováno výrobkem a pozvolna uvolňováno, a tedy může působit při vyšších koncentracích po delší dobu na léčeném místě pacienta. Takto lze docílit signifikantně lepších výsledků.  </p>
    <p num="69"> </p>
    <p num="70">V případě léčby oka může být vrstvený nanovlákenný výrobek na oko uchycen vhodným lepidlem, našit, překryt čočkou, a tak fixován na místě, adherován na místo pomocí povrchové chemie výrobku, vložením pod část rohovky a podobně. </p>
    <p num="71"> </p>
    <p num="72">Prvním konkrétním příkladem je terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> obsahující směs (např. 50:50) dvou kopolymerů polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu PVA 5-88 a PVA 40-88, 19,9 % (hmotn./hmotn.) gentamicinu a 0,2 % (hmotn./hmotn.) kyseliny hyaluronové. Polymerní zvlákňovací roztok pro výrobu uvedené vrstvy <u>2</u> obsahoval: </p>
    <p num="73"> </p>
    <p num="74">
      <tables id="tab0001" num="0001">
        <table>
          <tgroup cols="2">
            <colspec colnum="1" colname="col1"/>
            <colspec colnum="2" colname="col2"/>
            <tbody>
              <row>
                <entry>9 g 18% roztoku kopolymerů PVA v destilované a deionizované vodě</entry>
                <entry>1,62 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>8,4 ml roztoku gentamicinu o koncentraci 50 mg/ml</entry>
                <entry>0,42 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,27 g 1,5% roztoku kyseliny hyaluronové</entry>
                <entry>0,004 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,12 g 89% kyseliny fosforečné</entry>
                <entry>odpaří se</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,17 g 40% glyoxalu</entry>
                <entry>0,07 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>Celkem</entry>
                <entry>2,114 g</entry>
              </row>
            </tbody>
          </tgroup>
        </table>
      </tables>
    </p>
    <p num="75"> </p>
    <p num="76">Dle teoretického výpočtu je ve vláknech koncentrace <i>c</i> gentamicinu v hmotnostním poměru ku hmotnosti celé terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u>: </p>
    <p num="77"> </p>
    <p num="78"> </p>
    <p num="79"> </p>
    <p num="80">Uvedená terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> dle prvního konkrétního příkladu byla připravena ze zvlákňovacího roztoku výše metodou DC spinningu na přístroji Nanospider<sup>TM</sup> NS 1S500U (firma Elmarco s.r.o.), kde napětí mezi elektrodami bylo v rozmezí od 55 kV do 61 kV a vzdálenost mezi elektrodami byla mezi 15 až 30 cm. SEM analýza, ilustrovaná na Obr. 4, byla provedena na přístroji VEGA 3 SBU (firma TESCAN), kde vzorky byly předem pokoveny na přístroji Q150r (firma QUORUM) z důvody hromadění elektrického náboje během snímkování vzorků. </p>
    <p num="81"> </p>
    <p num="82">Uvedená terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> dle prvního konkrétního příkladu byla testována na antimikrobiální účinnost. Kultivace bakteriálních kultur byla prováděna na komplexních pevných a tekutých médiích. Tato média byla před použitím sterilizována 30 minut v autoklávu. Sterilizace probíhala při teplotě 121 ºC za přetlaku vodní páry 0,15 MPa. V případě pevných médií byl před sterilizací přidán agar na 2 % (hmotn./obj.).  </p>
    <p num="83"> </p>
    <p num="84">Růstové médium: 1 % (hmotn./obj.) pepton, 1 % (hmotn./obj.) kvasničný extrakt, 0,09 M NaCl, destilovaná voda. Pomocí 1 M NaOH upraveno pH na 7,0. Objem doplněn na 1 litr. </p>
    <p num="85"> </p>
    <p num="86">Postup: </p>
    <p num="87"> </p>
    <p num="88">1.    Mikrobiologické kultury <i>Micrococcus luteus</i> (G+ koky) a <i>Bacillus subtilis</i> (G- tyčinky) (obě kultury ze sbírky VŠCHT) byly naočkovány do 50 ml sterilního tekutého kultivačního média (10 g kvasničný extrakt, 10 g pepton, 5 g NaCl na 1 l dH2O) v Erlenmayerově baňce a umístěny přes noc na třepačku (15 hod, 80 ot./min, 30 °C). </p>
    <p num="89"> </p>
    <p num="90">2.    Druhý den byla změřena OD (600 nm) narostlých kultur, které byla rozředěny (100 µl bakteriální suspenze do 900 µl PBS). Ze zředěných kultur bylo odebráno 20 µl a rozetřeno sterilní jednorázovou hokejkou na Petriho misky (průměr 10 cm) s růstovým agarem (20 ml; 10 g kvasničný extrakt, 10 g pepton, 5 g NaCl, 20 g agar na 1 l dH2O). </p>
    <p num="91"> </p>
    <p num="92">3.    Na rozetřené kultury byly položeny vzorky nanomateriálů, např. uvedené terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u>, přičemž materiál byl vysterilován osvitem UV lampou, rozměr vzorků 3x3 cm a 6x6 cm. Misky byly uloženy na 24 h do inkubátoru (30 °C, 90% vlhkost). </p>
    <p num="93"> </p>
    <p num="94">Výsledky: </p>
    <p num="95"> </p>
    <p num="96">Testování působení na grampozitivní koky – kultura <i>Micrococcus luteus</i>
    </p>
    <p num="97"> </p>
    <p num="98">1.    bez ředění, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5a (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="99">
      <br/>
    </p>
    <p num="100">2.    10x zředěno, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5b (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="101"> </p>
    <p num="102">3.    100x zředěno, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5c (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="103"> </p>
    <p num="104">4.    1000x zředěno, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5d (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="105"> </p>
    <p num="106">Testování působení na gramnegativní tyčinky – kultura <i>Bacillus subtilis</i>
    </p>
    <p num="107"> </p>
    <p num="108">5.    bez ředění, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5e (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="109"> </p>
    <p num="110">6.    100x zředěno, naočkováno 20 µl kultury na Petriho misku, rozetřeno sterilní hokejkou, viz Obr. 5f (kontrola vlevo, vzorek 3x3 cm uprostřed, vzorek 6x6 cm vpravo) </p>
    <p num="111"> </p>
    <p num="112">Závěr: </p>
    <p num="113"> </p>
    <p num="114">1.    Testovaný materiál byl nastříhán sterilními nástroji na stejné čtverce o rozměrech 3x3 cm a 6x6 cm. Po přitisknutí materiálu na naočkované testovací agarové misky byla odebrána nosná tkanina. Okraje materiálu se nepravidelně „stáhly“ a okraje testovaných čtverců nebyly zcela rovné, viz Obr. 5a-5f uprostřed a vpravo. Materiál se nerozpouštěl a během testování nedošlo k pozorovatelným změnám ve vzhledu. </p>
    <p num="115"> </p>
    <p num="116">2.    Antibiotikum gentamicin se uvolňuje v dostatečné koncentraci, aby spolehlivě inhibovalo růst neředěné kultury. Působí lokálně plus inhibiční zóna cca 5 mm. </p>
    <p num="117"> </p>
    <p num="118">Druhým konkrétním příkladem je terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> obsahující směs (např. 10:90) dvou kopolymerů polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu PVA 5-88 a PVA 40-88, 1,6 % (hmotn./hmotn.) gentamicinu a 0,2 % (hmotn./hmotn.) kyseliny hyaluronové. Polymerní zvlákňovací roztok pro výrobu uvedené vrstvy <u>2</u> obsahoval: </p>
    <p num="119"> </p>
    <p num="120">
      <tables id="tab0002" num="0002">
        <table>
          <tgroup cols="2">
            <colspec colnum="1" colname="col1"/>
            <colspec colnum="2" colname="col2"/>
            <tbody>
              <row>
                <entry>30 g 10% roztoku kopolymerů PVA v destilované a deionizované vodě</entry>
                <entry>3 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>1 ml roztoku gentamicinu o koncentraci 50 mg/ml</entry>
                <entry>0,05 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,5 g roztoku kyseliny hyaluronové o koncentraci 10 mg/ml</entry>
                <entry>0,005 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,18 g 89% kyseliny fosforečné</entry>
                <entry>odpaří se</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,3 g 40% glyoxalu</entry>
                <entry>0,12 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>Celkem</entry>
                <entry>3,175 g</entry>
              </row>
            </tbody>
          </tgroup>
        </table>
      </tables>
    </p>
    <p num="121"> </p>
    <p num="122">Dle teoretického výpočtu je ve vláknech koncentrace <i>c</i> gentamicinu v hmotnostním poměru ku hmotnosti celé terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u>: </p>
    <p num="123"> </p>
    <p num="124"> </p>
    <p num="125"> </p>
    <p num="126">Třetím konkrétním příkladem je terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> obsahující směs (např. 90:10) dvou kopolymerů polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu PVA 5-88 a PVA 40-88, 38,7 % (hmotn./hmotn.) gentamicinu a 0,1 % (hmotn./hmotn.) kyseliny hyaluronové. Polymerní zvlákňovací roztok pro výrobu uvedené vrstvy <u>2</u> obsahoval: </p>
    <p num="127"> </p>
    <p num="128">
      <tables id="tab0003" num="0003">
        <table>
          <tgroup cols="2">
            <colspec colnum="1" colname="col1"/>
            <colspec colnum="2" colname="col2"/>
            <tbody>
              <row>
                <entry>9 g 18% roztoku kopolymerů PVA v destilované a deionizované vodě</entry>
                <entry>1,62 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>21,4 ml roztoku gentamicinu o koncentraci 50 mg/ml</entry>
                <entry>1,07 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,27 g 1,5% roztoku kyseliny hyaluronové</entry>
                <entry>0,004 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,12 g 89% kyseliny fosforečné</entry>
                <entry>odpaří se</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>0,17 g 40% glyoxalu</entry>
                <entry>0,07 g</entry>
              </row>
              <row>
                <entry>Celkem</entry>
                <entry>2,764 g</entry>
              </row>
            </tbody>
          </tgroup>
        </table>
      </tables>
    </p>
    <p num="129"> </p>
    <p num="130">Dle teoretického výpočtu je ve vláknech koncentrace <i>c</i> gentamicinu v hmotnostním poměru ku hmotnosti celé terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u>: </p>
    <p num="131"> </p>
    <p num="132"> </p>
    <p num="133"> </p>
    <p num="134">Příprava a testování terapeutické nanovlákenné vrstvy <u>2</u> dle druhého a třetího konkrétního příkladu probíhala analogicky. </p>
    <p num="135"> </p>
    <p num="136">Terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> dle prvního a třetího konkrétního příkladu s vyšším obsahem gentamicinu je efektivnější proti prokaryotickým buňkám, zejména bakteriím, než terapeutická nanovlákenná vrstva <u>2</u> dle druhého konkrétního příkladu. </p>
    <p num="137"> </p>
    <p num="138">Čtvrtým konkrétním příkladem je ochranná nanovlákenná vrstva <u>3</u> obsahující směs (např. 40:60) dvou kopolymerů polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu PVA 5-88 a PVA 40-88, bez gentamicinu a kyseliny hyaluronové. Polymerní zvlákňovací roztok pro výrobu uvedené vrstvy <u>3</u> obsahoval analogická množství jednotlivých složek, kromě gentamicinu a kyseliny hyaluronové, jako jsou uvedena v prvním až třetím konkrétním příkladu. </p>
    <p num="139"> </p>
    <p num="140"> </p>
    <p num="141">Průmyslová využitelnost </p>
    <p num="142"> </p>
    <p num="143">Unikátní variabilita vícevrstvého produktu umožňuje jeho použití jakožto vysoce účinného léčebného prostředku pro překrytí oka pacienta, a to za účelem zabránění vniknutí kontaminace ve formě bakterií, virů a jiných toxických částic ale také za účelem řízeného uvolňování aktivních látek, a tak napomáhat, zlepšovat a urychlovat proces léčby či hojení. Díky možnostem více vrstevnosti výrobku je možné řízeně dodávat specifické aktivní látky v klíčových etapách léčby, variovat množství a rychlost uvolňování aktivních látek, umožňuje obměňovat jednotlivé vrstvy během léčby, aniž by rána musela být obnažena, či je možné upravovat vlastnosti vícevrstvého nanovlákenného výrobku i během léčby, kdy je výrobek na postižené oko pacienta aplikován. </p>
    <description-of-drawings>
      <p num="1">Seznam vztahových značek:<br/>
        <br/>    1&amp;nbsp;&amp;nbsp;vrstvený nanovlákenný výrobek<br/>    2&amp;nbsp;&amp;nbsp;terapeutická nanovlákenná vrstva<br/>    3&amp;nbsp;&amp;nbsp;ochranná nanovlákenná vrstva.<br/>
        <br/>
      </p>
    </description-of-drawings>
  </description>
  <claims id="claim">
    <claim id="c0001" num="0001">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) pro překrytí oka, <b>vyznačující se tím</b>, že obsahuje alespoň jednu ochrannou nanovlákennou vrstvu (3) z kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) a alespoň jednu terapeutickou nanovlákennou vrstvu (2) z kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) a s obsahem gentamicinu v rozmezí 1 až 40 % hmotn./hmotn., přičemž terapeutická nanovlákenná vrstva (2) je na straně uzpůsobené jako přiléhající k oku.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0002" num="0002">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle nároku 1, <b>vyznačující se tím</b>, že kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) je polyvinylacetát částečně hydrolyzovaný na polyvinylalkohol.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0003" num="0003">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle nároku 2, <b>vyznačující se tím</b>, že stupeň hydrolýzy kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) je 80 až 95 mol. %.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0004" num="0004">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle nároku 3, <b>vyznačující se tím</b>, že stupeň hydrolýzy kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) je 87 až 89 mol. %.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0005" num="0005">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle kteréhokoliv z předchozích nároků, <b>vyznačující se tím</b>, že kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) je směs prvního kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 1 až 10 mPa.s a druhého kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 35 až 45 mPa.s, přičemž uvedené viskozity jsou výsledkem měření viskozity u 4% hmotn. vodného roztoku daného kopolymeru při 20 °C dle normy DIN 53015.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0006" num="0006">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle nároku 5, <b>vyznačující se tím</b>, že kopolymerem polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) je směs prvního kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 4 až 6 mPa.s a druhého kopolymeru polyvinylalkoholu a polyvinylacetátu (PVA) s viskozitou 39 až 41 mPa.s, přičemž uvedené viskozity jsou výsledkem měření u 4% hmotn. vodného roztoku daného kopolymeru při 20 °C dle normy DIN 53015.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0007" num="0007">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle kteréhokoliv z předchozích nároků, <b>vyznačující se tím</b>, že terapeutická nanovlákenná vrstva (2) obsahuje gentamicin v rozmezí 15 až 25 % hmotn./hmotn.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0008" num="0008">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle nároku 7, <b>vyznačující se tím</b>, že terapeutická nanovlákenná vrstva (2) obsahuje gentamicin v rozmezí 19 až 21 % hmotn./hmotn.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
    <claim id="c0009" num="0009">
      <claim-text>Vrstvený nanovlákenný výrobek (1) podle kteréhokoliv z předchozích nároků, <b>vyznačující se tím</b>, že terapeutická nanovlákenná vrstva (2) dále obsahuje kyselinu hyaluronovou v rozmezí 0,1 až 0,3 % hmotn./hmotn.<br/>
      </claim-text>
    </claim>
  </claims>
  <drawings id="draw">
    <figure id="f0001" num="0001" figure-labels="Obr. 1">
      <img id="i0001" file="img0001" he="857" wi="281" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0002" num="0002" figure-labels="Obr. 2">
      <img id="i0002" file="img0002" he="848" wi="334" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0003" num="0003" figure-labels="Obr. 3">
      <img id="i0003" file="img0003" he="853" wi="343" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0004" num="0004" figure-labels="Obr. 4">
      <img id="i0004" file="img0004" he="863" wi="480" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0005" num="0005" figure-labels="Obr. 5a">
      <img id="i0005" file="img0005" he="880" wi="264" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0006" num="0006" figure-labels="Obr. 5b">
      <img id="i0006" file="img0006" he="872" wi="286" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0007" num="0007" figure-labels="Obr. 5c">
      <img id="i0007" file="img0007" he="857" wi="266" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0008" num="0008" figure-labels="Obr. 5d">
      <img id="i0008" file="img0008" he="863" wi="276" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0009" num="0009" figure-labels="Obr. 5e">
      <img id="i0009" file="img0009" he="867" wi="276" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
    <figure id="f0010" num="0010" figure-labels="Obr. 5f">
      <img id="i0010" file="img0010" he="864" wi="280" img-content="drawing" img-format="jpg" orientation="portrait"/>
    </figure>
  </drawings>
</ep-patent-document>
